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励起用ダイクロイックミラーの選択に関する注意事項

　誤った「励起用ダイクロイックミラー」を選択してしまうと、うまく画像が取得できないことはおろか、顕微鏡自体が壊れてしまうこともありうるので、注意が必要である。特に多光子励起顕微鏡では、「RDM690」なる励起用ダイクロイックミラーを選択しなければならない。
　励起用ダイクロイックミラーを選択するには、「Image Acquisition Control」ウィンドの左端に縦に並んだアイコンの内、 をクリックして、Fig.1に示す「LightPath & Dyes」ウィンドウを開く。

Fig.1　「LightPath & Dyes」ウィンドウ

　「LightPath & Dyes」ウィンドウの中央に、赤く囲った部分が、励起用ダイクロイックミラーを選択する箇所であり、選択肢は以下のように６種類ある。

1. BS20/80
2. DM405/473
3. DM405/473/559
4. DM405/473/559/635
5. RDM690
6. None

２〜４番は共焦点蛍光顕微鏡モード（One photon mode）で使用されるダイクロイックミラーである。５番目が、MaiTaiを使う多光子励起顕微鏡モード（Two photon mode）で選択されていなければならないダイクロイックミラーである。 顕微鏡のモードを選択したら、自動的に２〜４番と、６番のダイクロイックミラーを切り替える設定にはなっているが、この「LightPath & Dyes」ウィンドウで一度ダイクロイックミラーの選択を変えてしまうと、その選択が次回使う時の設定に反映されてしまうので、 注意が必要である。また、多光子励起顕微鏡モードなのに、２〜４番のダイクロイックミラーが選択されていると、そのダイクロイックミラーが、近赤レーザでダメージを受けてしまう。

間違った選択の事例

• 多光子励起顕微鏡モード（Two photon mode）で、「BS20/80」が選択されていた場合
  BS20/80は、ビームスプリッターであり、近赤レーザの出力の内、20%を励起用のパスに、80%は他のパスに、分割する役割をする。つまり、励起として使われるレーザ強度が、1/5に低下することとなる。その結果、正しい励起用ダイクロイックミラー「RDM690」が選択されているときと比べ、レーザ出力をいつもより5倍に増やさないと、通常観察できていた２光子励起蛍光やSHGが観察出来なくなる。

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